利用动态光散射(DLS)分析病毒粒子

传统的检测溶液中病毒粒子的视觉技术提供了一个极小的采样体积的一瞥,而采用动态光散射的粒子分析方法产生一个集合溶液中粒子的平均值。

病毒颗粒在实验室培养产生了一个问题,因为它们需要在细胞内含有白蛋白和其他小蛋白质的培养基中生长,就像那些在胎牛血清(FBS)或最低必要培养基(MEM)溶液中。

当病毒颗粒从细胞中释放出来时,细胞碎片很大,可以通过离心分离,但不能清除培养基中较少量的蛋白质。从动态光散射实验中谨慎地选择分布参数,可以清楚地观察病毒颗粒的大小分布,在有明显较小的蛋白质组成的介质中。

背景

鱼类病毒

有许多鱼类病毒能够对休闲和商业鱼类种群造成巨大的经济损害。下面概述了四种病毒类型的典型家族病毒类型图像。

  1. 传染性造血坏死病毒(Infectious Hematopoietic Necrosis Virus, rbodoviridae)是一种子弹状病毒,宽约70 nm,长约170 nm,可感染虹鳟和红鲑鱼(左二)。
  2. 切喉鳟鱼病毒(一种正在发育的病毒),一种直径为25-35纳米的小圆形病毒;(下图左)
  3. LMBV(大口黑鲈病毒)属于虹膜病毒科(Iridoviridae),是一种二十面体形状的颗粒,直径约150 nm,在美国东南部的大口黑鲈种群中发现(右下)。
  4. 传染性鲑鱼贫血病毒(ISAV)通常在养殖的大西洋鲑鱼种群中发现,具有极高的死亡率。它属于正粘病毒科,病毒粒子直径通常在50-120 nm之间(右起第二)。

利用动态光散射(DLS)分析病毒粒子

图片来源:布鲁克海文仪器公司

在已知的孵育环境下,一种快速评估溶液中病毒粒子存在的技术是可取的,并选择DLS作为调查技术。

动态光散射

利用动态光散射(DLS)分析病毒粒子

图片来源:布鲁克海文仪器公司

自相关函数

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图片来源:布鲁克海文仪器公司

实验

  1. 样品由位于华盛顿州西雅图的美国地质勘探局西部渔业研究中心提供。在含有胎牛血清(FBS)的最低必需培养基中培养病毒颗粒,并在培养基中表达病毒颗粒。离心分离细胞及细胞碎片。携带病毒颗粒的细胞培养基在5°C冷藏,直到进行测量。
  2. 动态光散射(DLS)测量是在布鲁克海文仪器ZetaPALS仪器上进行的,该仪器配备了BI-MAS颗粒分级能力。
  3. 在25°C的条件下,样品可以在样品室中平衡至少5分钟,在25°C的聚苯乙烯试管中计算。采用NNLS反褶积算法降低DLS自相关数据。减小的粒度数据通过浓度和数量分布进行评估,结果导出为Excel格式,并在Origin 8.0中以图表形式显示。

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图片来源:布鲁克海文仪器公司

分布曲线

NNLS分布可以用表面积、数量、体积或测量的强度来衡量。强度加权显著突出了最大的颗粒,由于在直径的幂关系,其中数量加权突出了最小的颗粒。

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图片来源:布鲁克海文仪器公司

摘要和结论

结果明显地显示了病毒颗粒用投影时的平均尺寸标注为强度加权分布,但这些颗粒在数量分布中缺席。这表明病毒颗粒确实存在,但与细胞生长介质中的蛋白质和其他小分子相比,数量较少。

似乎确实存在其他一些大颗粒,这可能是其他细胞片段或表达的分子(RNA、蛋白质),由于其大小与病毒颗粒相当,不太可能在离心步骤中消除。适当的对照样品应允许病毒颗粒从游离细胞碎片中分化出来。

该信息的来源、审查和改编材料由布鲁克海文仪器公司提供。

欲了解更多信息,请访问布鲁克海文国家实验室仪器公司。

最后更新:2021年5月25日上午8:01

引用

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  • 美国心理学协会

    布鲁克海文国家实验室仪器公司。(2021年5月25日)。利用动态光散射(DLS)分析病毒粒子。News-Medical。2021年6月1日从//www.kgrcpa.com/whitepaper/20210525/Using-Dynamic-Light-Scattering-(DLS)-to-Analyze-Virus-Particles.aspx取回。

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    布鲁克海文国家实验室仪器公司。“利用动态光散射(DLS)分析病毒粒子”。News-Medical.2021年6月1日。(DLS) -to-Analyze-Virus-Particles.aspx < //www.kgrcpa.com/whitepaper/20210525/Using-Dynamic-Light-Scattering- >。

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    布鲁克海文国家实验室仪器公司。“利用动态光散射(DLS)分析病毒粒子”。News-Medical。-to-Analyze-Virus-Particles.aspx //www.kgrcpa.com/whitepaper/20210525/Using-Dynamic-Light-Scattering- (DLS)。(访问2021年6月1日)

  • 哈佛大学

    布鲁克海文仪器公司,2021年。利用动态光散射(DLS)分析病毒粒子.医疗新闻,2021年6月1日观看,//www.kgrcpa.com/whitepaper/20210525/Using-Dynamic-Light-Scattering-(DLS)-to-Analyze-Virus-Particles.aspx。

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